印跡膜有什么特點(diǎn)
標(biāo)簽： 轉(zhuǎn)印膜
生物印跡技術(shù)是將待測(cè)生物大分子結(jié)合到一定固相支持物（微濾膜）上的方法。主要印跡技術(shù)有Northern印跡、Southern印跡。生物印跡技術(shù)中的印跡膜是專門用于分離和檢測(cè)生物分子（如蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞等）的材料。
| 目錄 |
|
1、Northern印跡、Southern印跡、Western印跡區(qū)別對(duì)比 2、印跡膜特性
3、印跡膜性能驗(yàn)證 4、邁博瑞印跡膜參數(shù) |
一、Northern印跡、Southern印跡、Western印跡區(qū)別對(duì)比
|
|
Southern blot
|
Northern blot
|
Western blot
|
|
定義 |
用于識(shí)別特定DNA序列的程序 |
Southern blot的改編，通過與互補(bǔ)DNA的雜交來檢測(cè)特定RNA序列 |
用于鑒定蛋白質(zhì)中特定氨基酸 序列的印跡程序 |
|
開發(fā)者 |
1975年，愛德華 |
1977年，詹姆斯.阿爾溫等人 |
1979年，喬治.斯塔克 |
|
檢測(cè)到的分子類型 |
特異性DNA序列 |
特異性RNA序列 |
特定蛋白質(zhì) |
|
電泳 |
瓊脂糖凝膠電泳 |
甲醛瓊脂糖凝膠電泳 |
SDS PAGE/聚丙烯酰胺凝膠 |
|
印跡程序 |
毛細(xì)管轉(zhuǎn)移 |
毛細(xì)管轉(zhuǎn)移 |
電動(dòng)傳輸 |
|
探針 |
DNA探針 |
cDNA探針 |
一抗和二抗 |
|
樣本制備 |
變性處理 |
自然狀態(tài) |
自然狀態(tài) |
|
應(yīng)用 |
檢測(cè)給定樣品中特定DNA序列 |
識(shí)別給定樣品中特定RNA序列 |
識(shí)別給定樣品中的蛋白質(zhì)數(shù)量 |
|
檢測(cè)系統(tǒng) |
放射自顯影、光檢測(cè)和顏色變化 |
放射自顯影、光檢測(cè)和顏色變化 |
檢測(cè)光線和顏色變化 |
二、印跡膜特性
1、印跡膜作為印跡技術(shù)中的重要固相支持物的主要特性
|
名稱 |
特點(diǎn) |
|
NC 印跡膜 |
無支撐布 不添加洗滌劑 100% 純硝化纖維 高蛋白結(jié)合能力 毛細(xì)管率與厚度一致 背淺 |
|
PVDF 印跡膜 |
耐化學(xué)性 無變色 非易燃 高強(qiáng)度 疏水性 背景淺 高蛋白結(jié)合 |
|
尼龍印跡膜 |
親水性 高強(qiáng)度 高化學(xué)耐受性 高蛋白結(jié)合力 |
2、NC印跡膜、尼龍印跡膜和PVDF印跡膜的區(qū)別
|
|
正電尼龍印跡膜 |
硝酸纖維素印跡膜 |
PVDF印跡膜 |
|
DNA或RNA截留力 |
480-600ug/cm2 |
80-100ug/cm2 |
125-300ug/cm2 |
|
蛋白截留力 |
500ug/cm2 |
80-100ug/cm2 |
100-300ug/cm2 |
|
結(jié)構(gòu)強(qiáng)度 |
柔韌、耐化學(xué)試劑，可重復(fù)剝離 |
膜脆、易破碎，不可重復(fù)使用 |
強(qiáng)度高、耐高溫、可重復(fù)剝離 |
|
吸附力 |
電荷和疏水作用 |
疏水作用和電荷 |
疏水作用和電荷 |
|
是否需活化 |
無需活化 |
無需活化 |
需要活化 |
|
檢測(cè)方法 |
放射性標(biāo)記探針 |
放射性標(biāo)記探針 |
直接染色 |
三、印跡膜性能驗(yàn)證
- 印跡膜對(duì)生物分子的最大吸附能力驗(yàn)證
- 印跡膜轉(zhuǎn)印生物分子效果驗(yàn)證
- 印跡膜轉(zhuǎn)印燒穿檢測(cè)驗(yàn)證
- 轉(zhuǎn)印膜背景及靈敏度（最低檢測(cè)限度）驗(yàn)證
- 轉(zhuǎn)印膜吸附生物分子作用力（疏水和電荷）驗(yàn)證
四、邁博瑞印跡膜參數(shù)
| 名稱 | 濕潤(rùn)性 | 靈敏度和分辨率 | 背景 | 機(jī)械強(qiáng)度 | 溶劑耐受性 | 水潤(rùn)性 | 蛋白結(jié)合能力 | 適用染色方法 | 檢測(cè)方式 |
| Nylon66印跡膜 | 親水性 | 高 | 較高 | 軟而結(jié)實(shí) | 較差 | 緩沖溶液潤(rùn)濕 | >400μg/cm2 | 不能用陰離子染料 | 不能用陰離子染料，受限制 |
| NC轉(zhuǎn)印膜 | 親水性 | 高 | 低 | 干的NC膜易脆 | 差 | 緩沖溶液潤(rùn)濕，避免氣泡 | 80-110μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁 | 常規(guī)染色，可用放射性和非放射性檢測(cè) |
| PVDF轉(zhuǎn)印膜 | 疏水性 | 高 | 淺 | 機(jī)械強(qiáng)度高 | 好 | 100%的甲醇潤(rùn)濕 | 125-200μg/cm2 | 膠體金、麗春紅、酰胺黑、印度墨汁、考馬斯亮蘭 | 常規(guī)染色，較于NC膜可用考馬斯亮藍(lán)染色，ECL檢測(cè)和快速免疫檢測(cè) |
微信截圖_16934713831952(1).jpg)
印跡膜相關(guān)文章
- 印跡膜的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)
- 印跡膜有什么特點(diǎn)
- 尼龍Nylon轉(zhuǎn)印膜如何選擇?
- 硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)印膜使用注意事項(xiàng)
- NC轉(zhuǎn)印膜、PVDF轉(zhuǎn)印膜、正電荷尼龍轉(zhuǎn)印膜的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比
